1952年生于尼塔瓦大区。豪萨族。曾在法国学习，获数学和基础应用专业硕士学位、概率与统计学博士预备文凭以及矿业土木工程师证书。1980-1985年任尼日尔国家矿业局主任，1985年起任国家矿业公司秘书长。1990年参与组建尼日尔争取民主和社会主义党，长期担任党主席。

1993年2月，尼日尔进行了历史上第一次多党议会和总统选举，伊素福的民主和社会主义党获得了13个席位，他自己也赢得一个席位。民社党和其他反对派政党合组“变革力量联盟”，这个联盟在议会当中占到了多数席位，伊素福在总统选举中赢得了15.92%的选票，无缘末轮选举，变革力量联盟转而支持排名第二的马哈曼·奥斯曼。在3月27日的末轮选举当中，奥斯曼击败了国民社会发展运动候选人坦贾·马马杜，由于变革力量联盟在议会中占多数，伊素福成为新任尼日尔总理。

1994年9月，总统奥斯曼颁布政令，削弱总理职权，作为总理的伊素福愤然辞职，他的民社党也退出了联合政府，这使得联合政府失去了议会的多数席位，尼日尔不得不在1995年1月重新举行议会选举。伊素福与之前的对手国民社会发展运动结成了联盟，在选举当中获得了议会简单多数席位，伊素福当选为议长，这样，他和政见不同的总统形成了共治局面，随着政府与议会矛盾的加深，尼日尔政局陷入僵局，1996年1月，伊素福要求最高法院解除总统奥斯曼的职务，在混乱之中，易卜拉欣·巴雷·迈纳萨拉将军发动政变，推翻了奥斯曼总统，伊素福、总统奥斯曼和总理哈马·阿马杜一同被捕，一直被软禁到4月份，还被迫在电视台上发表讲话称，是不合理的政治制度导致了政变的发生，今后将支持政治制度的改革。

在1996年7月的，迈纳萨拉精心导演的为了使自己总统职位合法化的总统选举中，迈纳萨拉获得了压倒性胜利，伊素福排名第四，只拿到7.6%的选票。伊素福和其他三位候选人在投票开始的第二天被软禁了两个星期，此后，他拒绝同迈纳萨拉会面，还向高等法院上诉要求取消总统结果，但遭到驳回。随后民社党组织示威游行。7月26日，伊素福再次被捕，8月12日被释放。1997年1月11日，再一次要求民主的游行之后，伊素福和奥斯曼、坦贾三人再次被逮捕。

1999年4月，迈纳萨拉在政变中被杀，同年底尼日尔再次举行总统选举，伊素福排名第二，进入末轮选举，他得到了其他几位第一轮被淘汰的候选人的支持（包括前总理阿尔加比德），坦贾·马马杜得到了奥斯曼的支持。最终，伊素福被坦贾击败，伊素福宣布承认竞选失败，并向坦贾表示祝贺。同时在议会选举中，伊素福保住了自己的席位。

在2004年总统选举中，伊素福再次被坦贾击败，但是35%的得票率对于伊素福来说已经很不容易，因为在首轮败选的候选人全部转向了坦贾。在12月的议会选举中，伊素福再次保住了自己的席位。

2009年，民社党强烈反对坦贾总统关于修宪以便使自己能够继续参加大选的提议，6月4日，作为“保卫民主阵线”的领导人，2009年6月4日，伊素福宣布将于7日举行大游行，抗议坦贾试图通过公投修宪，使得自己“能够永远执政，建立u2018王国u2019”。

6月27日，坦贾宣布拥有紧急权力，伊素福呼吁军方忽略坦贾的命令，希望国际社会前来干预，6月30日，伊素福被军警逮捕，1个小时以后被释放，7月1日，尼日尔举行全国大罢工。

2009年8月4日，公投举行，尽管反对党一再呼吁抵制，公投最终通过了坦贾的提议。伊素福随后宣布，“反对党将会抵抗这场由坦贾总统导演政变，以免他在我们的国家建立独裁政权”，9月14日，伊素福被指控“滥用资金”，后被保释，伊素福流亡国外，10月29日，坦贾对伊素福和哈马·阿马杜发布了全球通缉令，30日，伊素福从尼日利亚返回首都尼亚美以便“与司法机构合作”。

2010年2月，坦贾被军事政变推翻，新政府宣布将筹备2011年总统选举，还政于民。2010年10月，伊素福被民社党提名为2011年总统选举候选人，很多观察家认为，伊素福很有可能在这场竞选中获胜。

2011年4月，优素福在大选中战胜对手奥马鲁，成功当选尼日尔总统。

2016年3月连任尼日尔总统。

2018年8月31日，国家主席习近平在人民大会堂会见尼日尔总统伊素福。

2019年5月22日，应中国国家主席习近平邀请，尼日尔共和国总统穆罕默杜·伊素福于5月26日至30日对中国进行国事访问。

2020年3月4日，中国驻尼日尔大使张立军会见尼日尔总统伊素福，转交习近平主席感谢信，感谢尼日尔对中国抗击新冠病毒肺炎疫情的声援。伊素福总统就中国在疫情防控方面所取得的重大积极成效向习近平主席和中国政府表示热烈祝贺，高度赞赏中国抗击疫情的坚定决心和面对疫情所展现出的强大组织动员力。

2020年6月2日，中国驻尼日尔大使张立军会见尼日尔总统伊素福，双方就加强疫情防控双边合作等交换意见。

2020年6月17日，尼日尔总统兼西非国家济共同体主席伊素福参加了中非团结抗疫特别峰会的线上会议，并发表讲话。伊素福表示西非国家经济共同体成员国赞赏并拥护中非合作论坛框架下的中非伙伴关系，正是这样的伙伴关系促成了中非团结应对疫情的行动。他认为，中国政府在这场与新冠疫情的斗争中取得了非凡的成绩，这增强了非洲伙伴们对中国的尊重和钦佩之情。

2020年3月27日，尼日尔总统伊素福发表公告说，为应对新冠肺炎疫情，全国即日起进入卫生紧急状态。